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TALEN敲除小鼠定制

TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。用TALEN方法制作knock out小鼠,不需要经过传统敲除所需要的ES细胞打靶阶段,周期大大缩短。相比于ZFN技术,TALEN的优势也非常明显突出,它的识别切割的效率更高,几乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影响。

论文中注明小鼠来源于南京大学—南京生物医药研究院可获现金奖励:

      奖励条件            奖励额度        

影响因子小于5分         500元

影响因子5—10分        1000元

影响因子10—20分       2000元

影响因子20分以上       5000元

相关已发表文献

TAL (transcription activator-like) effectors是细菌Xanthomonas感染植物时分泌的蛋白分子。这些蛋白分子通过其中心区的34个氨基酸的重复序列识别并结合到宿主基因的启动子上,激活植物基因的表达,从而帮助细菌进行感染。TAL effectors的此特征很快被大家认识并利用来作为靶向基因编辑的工具。

TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。TALEN蛋白分子包含DNA结合域和Fok1核酸酶,两个TALEN分子分别结合到靶点两侧,Fok1形成二聚体并发挥切割作用,生成双链断端,细胞内的非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ)修复机制启动,断口被修复同时随机的删除和插入一定数量的碱基,造成移码导致基因失活。

用TALEN方法制作knock out小鼠,不需要经过传统敲除所需要的ES细胞打靶阶段,周期大大缩短。相比于ZFN技术,TALEN的优势也非常明显突出,它的识别切割的效率更高,几乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影响。此项技术现已经成功应用于细胞、斑马鱼、果蝇、大鼠、小鼠及植物上,并且被研究者不断地尝试应用到其他更多的物种。此技术为研究者提供了一种新的思路,开辟了一条崭新的道路。


       Genomic control enabled by engineered TAL effector proteins
    (Science, Vol. 333, No. 6051. (30 September 2011), pp. 1843-1846)

           TALEN原理图(Nucleic Acids Research, 2011, 1–11)


参考文献:
1.Cermak, T., Doyle, E.L., Christian, M., Wang, L., et al. () Efficient design and assembly of custom TALEN and other TAL effector-based constructs for DNA targeting. Nucleic Acids Res., 2011, 1-11.
2.Bogdanove AJ, Voytas DF. TAL effectors: customizable proteins for DNA targeting. Science, 2011, 333(6051):1843-6.

 

敲除小鼠制作流程

•    分析gene序列,选择靶位点,设计TALEN载体

•    测试TALEN载体的打靶效率

•    受精卵的显微注射,移植

•    F0代小鼠的鉴定

•    F0代小鼠的遗传检测

如果您有定制TALEN敲除小鼠的意愿,请注册以及登陆后在在线订购中填写意向单,我们的项目经理将会根据您的要求来制定实验方案并主动与您联系。

TALEN相比于传统同源重组的优点:



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