技能 | 小鼠眼眶后静脉丛采血

采血是动物实验中经常应用的样本采集方法之一。根据实验要求和动物种类确定不同的采血方法。小鼠采血方式较多,主要有:眼眶后静脉丛,剪尾法,心脏采血,腹主动脉,后腔静脉,颈外静脉等。

其中眼眶后静脉丛采血法方法简单,便于掌握,采血成功率高,小鼠死亡率低。且血流较快,采血量多,伤口较小,愈合较快。但本方法采血不能避免组织液的混入,对于血样要求较高的研究应谨慎使用。另外,多次使用易引起感染,对后续试验结果存在一定影响。

详细的操作要点见下:

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麻醉⼩⿏,并且在采⾎前,在⼩⿏眼部周围使⽤眼科局部麻醉剂;

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采血者的左手拇指及食指压迫小鼠的颈部两侧,从背部较紧地握住小鼠颈部,使眼眶后静脉丛充血。小鼠整体抓在手里时,要确保小鼠身体保持直线姿势,否则可能会影响小鼠呼吸。

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注意颈部两侧皮肤抓的力度需要掌控好,太紧会导致小鼠呼吸不畅导致窒息。

 

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右手使采血器与鼠面成45℃的夹角,由眼内角刺入,针头斜面先向眼球,刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。

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刺入深度大约2~3mm。当感到有阻力时即停止推进,如果没有出血则轻微转动采血器或者将采血器退出约0.1~0.5mm,如果没有成功或者出血量较少,可在适当改变采血器角度,也许是采血器尖部没有对准出血处,再不行则松开,采新的小鼠。

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不要长时间对一只小鼠采血,会可能导致小鼠死亡。若穿刺适当血液能自然流入采血器中,当得到所需的血量后,立即松开颈部压力,同时,将采血器拔出,以防止术后穿刺孔出血。

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采血器拔出后,立即将血液打出,防止在采血器中出现凝血。

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用无菌棉擦拭创口,微微用力按压以止血。止血后观察1~2分钟,确认小鼠状态无异常后方可放回笼中。

采血时要注意一只成年小鼠的循环血量大约是1.5~2.5ml,大约体重的6~8%。在对营养状况良好的小鼠进行采血时,单次采血量最多可以到达循环血量的10%,这是避免出现不良反应的最大值。采血之后应该给予温热的等渗溶液补充,可以在2~3个星期内恢复原有的水平。